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Vol. 8. Issue 6.
Pages 629-643 (November - December 2002)
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Vol. 8. Issue 6.
Pages 629-643 (November - December 2002)
ARTIGO ORIGINAL/ORIGINAL ARTICLE
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Comparação das respostas celulares imunes induzidas por proteínas filtradas da cultura de Mycobacterium tuberculosis
Comparison of human cellular immune responses elicited by culture filtrate proteins of Mycobacterium tuberculosis
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Diane J. Ordway1, H. Silveira2, L. Costa3, S. Costa4, M. Martins5, R. Badura6, M.J. Arroz7, H.M. Dockrell8, S. Young9, F.A.A.N. Ventura10
1 Doutorada e investigadora no projecto de Investigação em Imunologia das Micobactérias, Centro de Malária e Outras Doenças Tropicais, Instituto de Higiene e Medicina Tropical, Universidade Nova de Lisboa, Rua da Junqueira, 96, 1349-008 Lisboa, Portugal.
2 Professor Auxiliar, UEI Malária e Centro de Malária e outras Doenças Tropicais, Instituto de Higiene e Medicina Tropical, Universidade Nova de Lisboa, 1349-008 Lisboa, Portugal.
3 Licenciada em Biologia e investigadora no projecto de Investigação em Imunologia das Micobactérias, Centro de Malária e Outras Doenças Tropicais, Instituto de Higiene e Medicina Tropical, Universidade Nova de Lisboa, Rua da Junqueira, 96, 1349-008 Lisboa, Portugal.
4 Licenciada em Farmacologia e investigadora no projecto de Investigação em Imunologia das Micobactérias, Centro de Malária e Outras Doenças Tropicais, Instituto de Higiene e Medicina Tropical, Universidade Nova de Lisboa, Rua da Junqueira, 96, 1349-008, Lisboa, Portugal.
5 Licenciada em Engenharia Biotecnológica e estagiária no projecto de Investigação em Imunologia das Micobactérias, Centro de Malária e Outras Doenças Tropicais, Instituto de Higiene e Medicina Tropical, Universidade Nova de Lisboa, Rua da Junqueira, 96, 1349-008 Lisboa, Portugal.
6 Médico na especialidade de Doenças Infecciosas; interno complementar no 4º ano da mesma especialidade no Hospital de Santa Maria, Serviço de Doenças infecciosas piso 5 Rua Miguel Pais 46, 5F, 2830 Barreiro.
7 Assistente Hospitalar Graduada de Patologia Clínica; Responsável pelo Laboratório de Hematologia e de Citometria de Fluxo do Serviço de Patologia Clínica do Hospital Egas Moniz, Rua da Junqueira 126, 1349-019 Lisboa, Portugal; Assistente convidada de Imunologia da Faculdade de Ciências Médicas da Universidade Nova de Lisboa.
8 Assistente na Unidade de Imunologia da London School of Hygiene & Tropical Medicine, Department of Infectious and Tropical Medicine, Immunology Unit - Keppel Street, London WC1E 7HT, UK
9 Assistente na Unidade de Imunologia da London School of Hygiene & Tropical Medicine, Department of Infectious and Tropical Medicine, Immunology Unit - Keppel Street, London WC1E 7HT, UK
10 Coordenador da Comissão Nacional de Luta Contra a SIDA, Palácio Bensaúde, Estrada da Luz, 153, 1600 Lisboa, Portugal; Responsável do projecto de Investigação em Imunologia das Micobactérias, Centro de Malária e Outras Doenças Tropicais, Instituto de Higiene e Medicina Tropical, Universidade Nova de Lisboa, Rua da Junqueira, 96, 1349-008 Lisboa, Portugal; Assistente hospitalar de Infecciologia, Serviço de Doenças Infecciosas e Parasitárias, Hospital Egas Moniz, Rua da Junqueira 100, 1349-008 Lisboa, Portugal; Professor regente da disciplina de Doenças Infecciosas e Parasitárias da Faculdade de Ciências Médicas da Universidade Nova de Lisboa.
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RESUMO

Foram comparadas em dadores com tuberculose pulmonar e indivíduos saudáveis as respostas blastogénicas e a produção de citocinas induzidas por dois filtrados de cultura de Mycobacterium tuberculosis, colectados em diferentes tempos. Tanto no grupo de dadores saudáveis, como no grupo de doentes com tuberculose pulmonar, as proteínas de curto prazo filtradas da cultura de M. tuberculosis (short term culture filtrate proteins-ST-CFP) induziram uma produção mais marcada de INF-γ do que as proteínas de médio prazo (mid term culture filtrate proteins-MT-CFP), enquanto que as MT-CFP induziram uma linfoproliferação mais elevada. Verificou-se uma heterogeneidade considerável nos controlos e os resultados indicaram que o contacto crónico e regular com doentes com tuberculose apresentaram respostas elevadas às ST-CFP. Em relação à estimulação com os perfis antigénicos, tanto a linfoproliferação como a produção de INF-γ se encontravam reduzidas em dadores com tuberculose pulmonar, quando comparados com os controlos. A presença dos antigénios ESAT-6, 10kDa, 19kDa e 30kDa do M. tuberculosis e do lipoarabinomanano (LAM), foi comparada em ambas as preparações utilizando o Western blotting. A MT-CFP contém ligeiramente mais lipoarabinomanano do que a ST-CFP e quantidades mais elevadas de ESAT-6 estão presentes na ST-CFP. A análise ao ARNm para o INF-γ, IL-4 e IL-10 confirmou que a produção de INF-γ estava reduzida em doentes com tuberculose pulmonar, sem qualquer aumento concomitante na produção de IL-4. Estes resultados mostram que variações ao longo do tempo de cultura do M. tuberculosis podem desencadear in vitro diferentes respostas imunitárias mediadas por células.

REV PORT PNEUMOL 2002; VIII (6): 629-643

Palavras-chave:
Tuberculose (TB)
proteínas filtradas de cultura
Proliferação linfocitária
Interferão-γ
ABSTRACT

Blastogenic responses and cytokine production induced by two culture filtrates of Mycobacterium tuberculosis collected at different time points were compared in donors with pulmonary tuberculosis and healthy Mantoux-positive BCG vaccinated controls. The short term culture filtrate proteins (ST-CFP) induced stronger IFN-γ production than the mid term culture filtrate proteins (MT-CFP), in both healthy BCG-vaccinated controls and patients with pulmonary tuberculosis, while the MT-CFP induced higher lymphocyte proliferation. Considerable heterogeneity was found within the healthy subjects, results indicated that chronic tuberculosis contacts elicited higher responses toward ST-CFP. Pulmonary tuberculosis donors demonstrated reduced proliferation and IFN-γ production towards the antigen profiles when compared to the healthy subjects. The presence of ESAT-6, 10kDa, 19kDa, 30kDa antigens of M. tuberculosis and lipoarabinomannan (LAM) were compared in both preparations using Western blotting. Although the MT-CFP contained slightly more lipoarabinomannan than the ST-CFP and higher quantities of the ESAT-6 was present in ST-CFP, there were no other obvious differences in the composition of the two culture filtrates. Analysis of mRNA for IFN-γ, IL-4 and IL-10 confirmed that IFN-γ production was reduced in patients with pulmonary tuberculosis without any concomitant increase in IL-4. These results show that variations in time of culture of M. tuberculosis, can elicit different cell-mediated immune responses in vitro.

REV PORT PNEUMOL 2002; VIII (6): 629-643

Key-words:
Tuberculosis (TB)
culture filtrate proteins
Lymphocyte proliferation
Interferon-γ
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